二、实验室检测工作程序
（一）哨点医院采集的流感样病例标本。
先进行甲型和乙型流感病毒通用引物核酸检测，如：
1.乙型阳性，则进行季节性流感病毒分离培养；
2.甲型阳性，则进行甲型H1N1流感病毒核酸检测，如阳性，则将阳性标本送具备甲型H1N1流感病毒分离培养能力和符合生物安全要求的网络实验室继续进行病毒分离；其他甲型阳性标本进行病毒分离，用血凝抑制试验或病毒核酸检测技术进行病毒亚型鉴定；
3.无法进行流感病毒亚型鉴定的病毒分离物和原始标本，要在48小时内送至国家流感中心鉴定。
（二）甲型H1N1流感疑似病例标本。
先进行甲型H1N1流感病毒核酸检测，如检测阳性在具备病毒分离培养能力和符合生物安全要求的实验室继续进行病毒分离，不具备病毒分离培养能力的实验室送其他具备病毒分离培养能力和符合生物安全要求的实验室进行病毒分离培养。
（三）流感样病例暴发疫情标本。
各网络实验室首先应用核酸检测技术检测乙型流感病毒、甲型流感病毒、季节性流感H1N1和H3N2亚型、甲型H1N1流感病毒。然后根据核酸检测的结果，分别进行季节性流感病毒分离，或在具备甲型H1N1流感病毒分离培养能力和符合生物安全要求的网络实验室继续进行甲型H1N1流感病毒分离。
无法进行流感病毒亚型鉴定的病毒分离物和原始标本，要在48小时内送至国家流感中心鉴定。
流感病毒之外的呼吸道病原检测，可由当地卫生行政部门组织专家组，结合病例的临床表现和已排除的实验室结果，拟定检测项目和计划后，再开展检测。
（四）甲型H1N1流感病毒阳性标本和各网络实验室分离到的各型别/亚型的流感毒株，须在1周内送至国家流感中心。
三、实验室检测工作注意事项
1.各网络实验室根据自身条件，确定采用RT-PCR或Real-time RT-PCR方法，可利用阳性甲型H1N1核酸参考品进行两种检测方法的灵敏度比较，根据上述确定的检测顺序，采用灵敏度较高的方法进行检测。在试剂合格的情况下，Real-time RT-PCR的灵敏度较高。
2.各网络实验室检测时，应注意根据不同试剂公司的Real-time RT-PCR或RT-PCR试剂盒的说明书设定有关反应条件（温度、时间、循环数等）。
3.对疑似病例标本，在阳性对照、阴性对照、RNaseP质控对照均成立的情况下，如果甲型H1N1流感特异性检测引物为阴性，可判断该标本甲型H1N1流感阴性。核酸检测结果仅针对于所检测的标本，对于核酸检测阴性的标本，并不能排除患者患有甲型H1N1流感，需要结合临床和流行病学资料，对于高度可疑的病例，可以重新采样或者进行血清学检测，回顾性检测甲型H1N1病毒感染。
